基于正交试验法多指标优选红麻凝胶膏提取工艺

鉴定为正品。

2方法与结果

21盐酸伪麻黄碱，盐酸麻黄碱，羟基红花黄色素A含量测定方法的建立

211色谱条件赛分色谱柱Sepax Bio-C18（250 mm×46 mm，5 μm）;流动相A：甲醇，流动相B：乙腈，流动相C：01%磷酸（含01%三乙胺），梯度洗脱（0～22 min，5%B，95%C;23～33 min，2%B，72%C）;流速为1 mL·min-1;检测波长为210 nm和403 nm;进样量为10 μL;柱温30℃。

212溶液的制备麻黄混合对照品溶液：分别精密称取盐酸麻黄碱对照品，盐酸伪麻黄碱对照品，加甲醇制成含盐酸麻黄碱对照品00445 mg·mL-1，盐酸伪麻黄碱对照品00430 mg·mL-1的混合对照品溶液。

羟基红花黄色素A对照品溶液：精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加20%甲醇制成含羟基红花黄色素A对照品01084 mg·mL-1的对照品溶液。

供试品溶液：按25倍日处方量称取药材，其中一部分药材提取完挥发油后过滤，滤液备用;将药渣与剩余药材混合，加8倍量水提取3次，每次1 h，滤过，合并滤液，经045μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液：按供试品制备方法制备缺麻黄和红花的阴性对照品溶液。

213方法学考察专属性试验：分别精密吸取麻黄混合对照品溶液，羟基红花黄色素A对照品溶液，供试品溶液，阴性对照品溶液各10μl，注入高效液相色譜仪，按上述色谱条件检测。结果对照品溶液和供试品溶液在相同的保留时间均有出峰，阴性对照无干扰，如图1。说明该测定方法专属性强，无干扰[5-6]。

线性范围考察 精密称取盐酸麻黄碱对照品，盐酸伪麻黄碱对照品适量，用甲醇稀释制成盐酸麻黄碱对照品浓度为00223 mg/mL～02058 mg/mL，盐酸伪麻黄碱对照品浓度为00215 mg/mL～01710 mg/mL的混合对照品溶液，另精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加20%甲醇制成含羟基红花黄色素A对照品浓度为00215 mg/mL～02168mg/mL的对照品溶液。在上述色谱条件下，分别取上述对照品溶液10 μL注入液相色谱仪测定峰面积，以进样量x为横坐标，峰面积y为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：y=14932x+42588（r=09999），y=17605x-20029（r=09999），y=16238x+38284（r=09999）。结果表明：盐酸麻黄碱在02-21μg内，盐酸伪麻黄碱在02-17μg范围内，羟基红花黄色素A在02-22μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。

精密度实验 吸取212项下样品溶液适量，重复测定6次，结果盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱，羟基红花黄色素A峰面积的RSD值分别为075%，079%，081%，表明该方法精密度良好。

稳定性实验 精密量取212项下混合对照品溶液，在0，2，4，6和8h分别进样10 μL，记录3个成分的峰面积，计算RSD分别为041%，051%，046%，结果表明盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱，羟基红花黄色素A均在8h内稳定。

重复性实验 取同一批样品6份，照212项下方法制备供试品溶液，依照上述色谱条件平行操作测定，记录峰面积，计算含量。结果3个成分的RSD值均小于30%，表明本方法的重复性良好。

耐用性实验 取同一批样品，照212项下方法制备供试品溶液，改变色谱柱温度±5℃、流动相比例±5%，流速±2%，进行耐用性试验。结果RSD<30%，说明本方法稳定。

加样回收率实验 精密量取已知盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱，羟基红花黄色素A含量的样品5 mL，共9份，每3份为一组，分别精密加入含盐酸麻黄碱对照品00445 mg·mL-1，盐酸伪麻黄碱对照品00430 mg·mL-1，羟基红花黄色素A对照品01084 mg·mL-1的混合对照品溶液25 mL，5 mL，75 mL，混匀，依法制备供试品溶液。依照上述色谱条件平行操作测定，记录峰面积，最后计算盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、羟基红花黄色素A的回收率和RSD。结果盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、羟基红花黄色素A的平均回收率分别为：982%（RSD=12%）、995%（RSD=11%）、978%（RSD=14%）。由实验结果可知，各成分的加样回收率结果良好，适合用于红麻凝胶膏中有效成分的含量测定[7-9]，见图1。

22正交设计实验优化提取工艺根据单因素考察的结果，选定提取时间、提取次数、加水量为考察因素，以盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、羟基红花黄色素A含量和干浸膏得率为指标综合评分，应用L9（34）正交试验表进行试验。按处方量比例准确称取各味药材，共9份，编为1-9号，提取液过滤，定容即得[10-12]。

221干浸膏得率的测定精密移取上述提取液液25 mL，置于已经恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，置烘箱中干燥至恒重，减去皿重，计算干浸膏得率。

222测定方法精密吸取麻黄混合对照品溶液，羟基红花黄色素A对照品溶液和上述样品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，计算样品中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、羟基红花黄色素A的含量，方差分析采用spss100軟件，结果见表1-2。

223结果由表1可知，3个因素中对提取工艺的影响顺序为B（提取次数）>C（加水量）>A（提取时间），由方差分析结果可知，因素B（提取次数）对综合评分的影响有显著性差异，因素A（提取时间）和因素C（加水量）的影响未达到显著性差异，由正交试验得出的最优提取条件是A3B3C3，即加10倍量水、提取3次、每次90 min，但考虑到能源的节约，故将最优条件调整为A2B3C3，即加10倍量水、提取3次、每次1 h，以此条件进一步进行验证试验。

224验证实验按处方量比例称取红花，麻黄等药材，按最佳提取工艺进行3批验证试验，结果综合评分分别为100，9688，9851，RSD为158%，表明该工艺稳定可靠[13-14]。

3讨论

由于本制剂为复方，药效成分复杂，使用单一成分作为考察指标可能会影响制剂质量，故选择方中两味君药的有效成分及干浸膏量作为考察指标[15-16]。

在混合对照品的制备过程中，首先将盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱和羟基红花黄色素A三个对照品精密称定后混合溶解在甲醇中，用选定的色谱条件进行检测时发现，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰对称因子和分离度均能达到要求，但羟基红花黄色素A峰出现分裂，考虑可能是对照品的原因，后按照212方法重新配制对照品后再按照选定色谱条件进行检测后发现，盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱和羟基红花黄色素A峰对称因子和分离度均能达到要求，说明按照文中选定色谱条件进行对照品检测时，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱与羟基红花黄色素A应分别配制。

在进行验证实验时，考虑到提取时间和加水量对综合评分的影响未达到显著性差异，在节约能源的基础上，在选定最佳工艺时同时进行了加8倍水，加6倍水和提取05小时的工艺考察，最终比较发现当加水量为10倍，提取3次，每次1小时时综合评分最佳。[KH*1D]

参考文献：

[1]李孟泽，汪永泉，赵国伟，等杉树皮夹板配合中药外敷治疗儿童肱骨髁上骨折疗效研究[J].现代医药卫生，2018，16：2455-2459

[2]周欣欣，罗贤强，张俊清，等中药散剂研究的现状[J].海南医学，2019，30（3）：392-394

[3]何蕾红花提取物生物活性成分的研究[D].兰州理工大学，2016

[4]黄玲，王艳宁，吴曙粤中药麻黄药理作用研究进展[J].中外医疗，2018（7）：195-198

[5]徐山新疆不同产地红花中羟基红花黄色素A的含量测定[J].内蒙古中医药，2019，1：99-128

[6]吕剑豪，张海平，高小川，等HPLC法测定麻杏止咳片中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量[J].中药材，2015，12：2626-2627

[7]孙琳栀味安神浓缩丸制剂工艺与质量标准研究[D].郑州大学，2018

[8]李敏，焦敏，王长虹，等HPLC法同时测定复方骆驼蓬子凝胶剂中6种成分的含量[J].新疆医科大学学报，2018，8：1010-1015

[9]姜晖多指标分析方法在精制冠心颗粒等8种中药复方制剂质量控制方面的应用研究[D].河北医科大学，2015

[10]杨伟兴，刘菊容，肖国辉，等痛风消颗粒知母水提取工艺优化[J].海峡药学，2019，2：44-46

[11]佘守军，郑如程，罗琴，等正交试验优化凤丹皮中单萜苷的煎煮工艺[J].湖北医药学院学报，2019，2：140-142+147

[12]丛日琳，岳媛媛，王旭超黄芩苷工业化生产的实验研究[J].中央民族大学学报（自然科学版），2019，1：5-11

[13]郑路静，刘庆焕，陶遵威复方红景天滴丸的制备工艺研究[J].天津中医药大学学报，2019，1：84-87

[14]谢冰，马幸福，李瑞清，等正交实验法优选唐古特大黄茎的提取工艺[J].国际药学研究杂志，2018，10：789-794

[15]苏松柏，张建玲，张丽丽，等栀龙凝胶膏贴的水提工艺研究[J].中国民族民间医药，2018，1：37-40

[16]石征蓉，谷江华，杨秀青，等基于多指标权重分析和正交设计法优选糖肾清毒颗粒的提取工艺[J].辽宁中医杂志，2018，3：577-582

（收稿日期：2019-07-16）

推荐访问:红麻 正交 优选 凝胶 提取