鉴定为大戟科植物甘遂E.kansui T. N. Liou ex T. P. Wang的干燥块根，批号2013.9.14。
醋甘遂：将所购生品依照2010年版《中国药典》（一部）醋炙法（附录ⅡD）加醋拌匀闷透，待醋被吸尽后，炒锅加热至260 ℃左右，翻炒9 min至颜色加深，略有焦斑，出锅放凉。每100 kg甘遂用醋30 kg。打粉备用（得率为99.5%）。
称取适量醋甘遂粉末（过4号筛），加10倍量95%乙醇回流提取2次，每次2 h，趁热过滤，残渣加10倍量水煎煮2次，每次2 h，趁热过滤后合并4次滤液并浓缩，将浓缩液依次以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等倍萃取10次，回收溶剂，减压干燥至恒重，临用前以0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液稀释至34 g·L-1（均按生药量计算，对应剂量约为临床使用剂量的4倍），即得各相应部位供试液。将经正丁醇萃取完的水部位浓缩，减压干燥至恒重，临用前以0.5%CMC-Na溶液稀释至34 g·L-1，即得水部位供试液。
阳性药：称取适量呋塞米片，加0.5%CMC-Na制成0.42 g·L-1的药液。
1.3 动物
雄性SD大鼠，SPF级，体重（230±20） g，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，动物许可证号SCXK（浙）2014-0001。
2 方法
2.1 分组、造模及给药
将SD大鼠置于室温、通风的清洁级动物室中，自由摄食饮水，适应3 d后，仿Aston利尿筛选法筛选符合标准的大鼠，进入正式实验。取合格SD大鼠56只，按体重随机分为7组，每组8只，分别为空白组、模型组、模型阳性药组、模型石油醚组、模型乙酸乙酯组、模型正丁醇组、模型水部位组（简称阳性药组、石油醚组、乙酸乙酯组、正丁醇组、水部位组）。将冻存的Walker-256细胞株37 ℃复苏呈液态，1 000 r·min-1离心5 min，沉淀用生理盐水悬浮至约含细胞个数1.2×108/mL，每只大鼠注射1 mL，进行传代，将传代后的腹水抽出进行细胞计数，用生理盐水稀释至细胞个数1×107/mL，再给其余大鼠进行腹腔注射，每只注射1 mL，复制癌性腹水模型。空白组、模型组给予0.5%CMC-Na灌胃，其余各组给予相应药液灌胃，给药体积0.01 mL·g-1，每日1次，连续7 d。
2.2 观察方法
给药后观察大鼠精神状态，行为活动，皮肤毛色，饮食状况，二便情况，死亡情况，记录死亡时间。
2.3 指标检测
2.3.1 大鼠尿量、腹水量、尿钠钾氯离子水平及尿pH 第4天给药后，将各组大鼠置于代谢笼中，禁食不禁水，收集24 h尿液，测量尿液体积，测定尿液中钠、钾、氯离子水平及pH。末次给药1 h后，放腹水，通过计算体重的差值间接测量腹水量。
2.3.2 大鼠血清肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮含量 各组大鼠于第7天给药1 h后颈总动脉取血，静置30 min后3 500 r·min-1离心10 min，取上清液备用。血清肾素，血管紧张素Ⅱ，醛固酮含量测定通过试剂盒完成。
2.4 数据分析
实验数据采用SPSS 19.0软件进行统计分析，各组定量检测数据以±s表示，2组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差（One-Way ANOVA）分析，组间比较采用LSD检验，P<0.05为差异有统计学意义。数据方差不齐，不满足t检验条件时，采用Wilcoxon秩和检验，P<0.05为差异有统计学意义。
3 结果
3.1 醋甘遂不同极性部位对各组大鼠一般情况的影响
实验中无大鼠死亡现象。空白组大鼠精神状态良好，毛发光泽，行动灵活，二便正常。模型组大鼠精神萎靡，眼神黯淡，毛发无光泽，耸毛，蜷缩，腹部胀大，严重者嘴唇青紫，尿血，肛周污秽。各模型给药组大鼠精神不振，眼无神，毛色发黄，腹部肿胀，与模型组比较，症状有所减轻。
3.2 醋甘遂不同极性部位对各组大鼠尿量及腹水量的影响
与空白组比较，模型组大鼠尿量显著减少（P<0.05），生成腹水。与模型组比较，各模型给药组大鼠尿量均有增加趋势，其中阳性药组和乙酸乙酯组大鼠尿量增加显著（P<0.05），石油醚组和正丁醇组尿量增加无显著性差异，水部位组作用不明显。乙酸乙酯组、正丁醇组和石油醚组大鼠腹水量有减少趋势，但无统计学意义（表1）。
3.3 醋甘遂不同极性部位对各组大鼠钠、钾、氯离子及尿液pH的影响
与空白组比较，模型组大鼠尿中钠、钾、氯离子水平及尿pH显著升高（P<0.01）。与模型组比较，石油醚组、正丁醇组大鼠尿中钠、钾离子含量，阳性药组和乙酸乙酯组大鼠尿中钠、钾、氯离子及阳性药组、石油醚组、乙酸乙酯组、正丁醇组大鼠尿pH均显著降低（P<0.05，P<0.01）。其中乙酸乙酯部位功效最为显著（表2）。
3.4 醋甘遂不同极性部位对各组大鼠肾素-血管紧张素Ⅱ-醛固酮系统的影响
与空白组比较，模型组大鼠血清中肾素，血管紧张素Ⅱ，醛固酮含量均显著升高（P<0.01）。与模型组比较，阳性药组、石油醚组、乙酸乙酯组、正丁醇组大鼠血清肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮含量均显著降低（P<0.01）（表3）。
4 讨论
中医在研究有毒中药时以“有故无殒”为重要指导思想。“有故无殒”辨证用药减毒的理念，实质是研究药物与特定证候或机体状态间的对应关系及其内在的变化规律[2]。当药物作用于正常机体，毒性将作用于机体本身;若机体有邪气入侵，药物将作用于病邪，从而产生治疗作用[3]。前期研究表明醋甘遂对于病理状态下动物有比正常生理状态下较低的毒性，一定剂量范围内表现为“有故无殒”[4]。醋甘遂具泻水逐饮、消肿散结之效，可治疗与改善水肿胀满、胸腹积水等，故本实验选用腹水模型来研究醋甘遂不同极性部位泻水逐饮的功效。目前可用于腹水研究的模型主要有癌性腹水模型、肝硬化腹水模型、腹膜炎相关腹水模型等。肝硬化腹水模型建模周期长，动物致死率高;腹膜炎腹水模型产生腹水量少，不适用于利水药物的评价;癌性腹水模型可模拟临床肿瘤腹水患者，且成模周期短，成模率高，稳定性强[5]，故本实验选用癌性腹水模型进行试验。
癌性腹水是中晚期恶性肿瘤常见的并发症，多起因于肿瘤转移种植损伤浆膜引起的浆膜毛细血管通透性增加，致使蛋白质渗出液溢入浆膜腔[6]。癌性腹水可加重机体炎症及脏器病变，严重时危及生命。现代中医认为腹水属“臌胀”范畴，对于腹水重、急者，应采用峻泻之法。《素问》言：“中满者，泻之于内。”[7]甘遂性味苦寒，泻下作用峻猛，可使体内滞留水液随二便排出，有效缓解和改善癌性腹水症状。
肿瘤患者腹水增长到一定程度时，大量腹水压迫肾脏，出现少尿症状，影响体内钠、钾、氯离子交换，导致体液电解质紊乱及酸碱失衡，并对肾素-血管紧张素Ⅱ-醛固酮系统产生影响。肾素-血管紧张素Ⅱ-醛固酮系统具有广泛的生物学效应，是正常机体调节血压和水盐代谢的重要系统[8]。大量腹水的增长导致全身有效循环血量减少，肾小球血量相应减少[9]，同时肾的球旁细胞感受钠量减少的刺激[9-10]，致入球小动脉压力感受器分泌肾素增加。血管紧张素原在肾素的作用下生成血管紧张素Ⅰ，血管紧张素Ⅰ在血管紧张素转换酶催化裂解生成血管紧张素Ⅱ[10-12]。血管紧张素Ⅱ参与炎症细胞的聚集[8]，并刺激肾上腺皮质球状带分泌醛固酮，对醛固酮产生细胞样作用[11]增加其产生。醛固酮含量的增高，使肾脏集合管对水的通透性增加[13]，钠离子重吸收增加，致细胞外液容量增多，尿量排出减少，加重水钠潴留。
本实验室前期研究发现，醋甘遂在34 g·L-1（按生药量计算）剂量下对癌性腹水模型大鼠毒性较正常大鼠显著降低，表现出一定的保护作用，故本实验选用该剂量。本实验中，模型组大鼠尿量减少，腹水生成，尿钠、钾、氯离子水平、尿pH及血清肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮含量明显升高。各给药组较模型组大鼠有不同程度尿量增加，腹水量减少的趋势，各组腹水量减少无显著性差异可能与用药周期较短有关。各给药组大鼠尿钠、钾、氯离子水平和尿pH均较模型组显著降低，趋于正常;血清肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮含量也有不同程度降低。提示醋甘遂各极性部位可不同程度减轻癌性腹水模型的病理症状，起到不同程度利尿，减轻癌性腹水引起的机体电解质紊乱、体液酸碱失衡，调节血清肾素-血管紧张素Ⅱ-醛固酮系统减少肾脏水分重吸收，缓解水肿之效。其中，醋甘遂乙酸乙酯部位功效显著，石油醚部位和正丁醇部位作用程度不及乙酸乙酯部位，水部位作用较弱，对各指标改善均不明显。综合各指标趋势，推测醋甘遂乙酸乙酯部位为其泻水逐饮的功效部位。本研究亦提示醋甘遂泻水逐饮功效实现的途径可能是：①降低肾内血管渗透压而利尿，减轻腹水压迫导致的少尿症状，调节体内外液体交换，减少腹水生成;②缓解体内水液电解质紊乱现象，调节体液酸碱失衡;③调节血液肾素-血管紧张素Ⅱ-醛固酮系统，减轻水肿。但醋甘遂泻水逐饮功效的物质基础和作用机制还有待进一步深入研究。
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[责任编辑 马超一]