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【摘要】目的：分析研究几种药品微生物限度检查方法。方法：选择8种中成药参芎胶囊、益母草胶囊、血栓心脉宁胶囊、牛黄解毒片、羚羊感冒片、双黄连片、骨筋丸胶囊、云芝肝泰颗粒，使用5种阳性对照菌回收率试验，测定中成药成分中是否有抑菌成分。结果：回收率试验结果显示：参芎胶囊、益母草胶囊、羚羊感冒片的回收率达到70%以上，说明其无抑菌作用;牛黄解毒片、双黄连片、云芝肝泰颗粒有一定的抑菌作用，可通过培养基稀释法对其抑菌作用进行消除;血栓心脉宁胶囊、骨筋丸胶囊的抑菌作用较强，需要通过薄膜过滤法将抑菌作用消除。结论：常规法对参芎胶囊、益母草胶囊和羚羊感冒片可进行微生物限度检查，牛黄解毒片、双黄连片、云芝肝泰颗粒能够利用培养基稀释法开展微生物限度检查;血栓心脉宁胶囊、骨筋丸胶囊可使用薄膜过滤法进行微生物限度检查。
【关键词】微生物;药品;微生物限度检查;薄膜过滤法
【中图分类号】R248.3【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2019）06-230-01
在药品检查时，对含有抑菌成分的中成藥给予微生物限定检查，需要将其消除抑菌活性[1]。随着2005年版药典的实施，在标准审核工作及监督检查工作中，越来越重视了微生物检验方法[2]。但是由于供试品的抑菌成分干扰，会导致很多样品的阳性试验结果为阴性，引起真实结果失真[3]。尤其在中成药检查的过程中，缺乏对具体微生物限度检查方法。本研究对8种中成药微生物限度检查方法进行了验证，如下：
1 材料与方法
1.1 材料 选择8种中成药参芎胶囊、益母草胶囊、血栓心脉宁胶囊、牛黄解毒片、羚羊感冒片、双黄连片、骨筋丸胶囊、云芝肝泰颗粒。
参芎胶囊：陕西健民制药有限公司，国药准字B20020851。益母草胶囊：沈阳永大制药有限公司，国药准字Z20053022。血栓心脉宁胶囊：吉林一正药业集团有限公司，国药准字Z22022536。牛黄解毒片：广东生命一号药业有限公司，国药准字Z44022761。羚羊感冒片：天津天士力（辽宁）制药有限责任公司，国药准字Z21020333。双黄连片：陕西白鹿制药股份有限公司，国药准字Z10960036。骨筋丸胶囊：哈药集团三精千鹤制药有限公司，国药准字Z20063516。云芝肝泰颗粒：神威药业集团有限公司，国药准字Z13020773。
1.2 方法
试验所用菌株包括：金黄色葡萄球菌;大肠埃希菌;白色念珠菌;枯草芽孢杆菌;黑曲霉菌。
制备菌液：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌;大肠埃希菌均在35℃下培养18h，加水稀释至含菌浓度为50～100个/ml;白色念珠菌在25℃下培养1～2d，使用生理盐水稀释为50～100个/ml;黑曲霉菌在25℃下培养一周，加水3～5ml，洗去孢子，用吸管吸出菌液，放置在无菌试管，稀释为50～100个/ml。
使用不同微生物限度检验方法进行检测。常规法：使用1：10供试液1ml，加入到琼脂培养基进行细菌计数[4]。培养基稀释法：选择每1ml供试液（1：10稀释液）等量注入5皿，每皿为0.2ml供试液，并进行回收试验。薄膜过滤法：取1：10供试液共10ml，放置在灭菌试管中，离心取上清液1ml，加入薄膜过滤器，冲洗，加菌液1ml后放置在琼脂平板[5]。
2 结果
常规法回收率试验结果显示：参芎胶囊、益母草胶囊、羚羊感冒片的回收率达到70%以上，说明其无抑菌作用，见表1
3 讨论
几乎所有的药品均需要在安全性检查后才能应用在临床中，而微生物检查是其中常规且重要的部分[6]。2005年在中华人民共和国药典规定药品进行微生物限度检验或者无菌检验法测定时，需要进行检验方法的验证，以确认何种方法适合药品检查[7]。
本研究对8种中成药进行了微生物限度方法学的验证，结果显示常规法对参芎胶囊、益母草胶囊和羚羊感冒片可进行微生物限度检查，牛黄解毒片、双黄连片、云芝肝泰颗粒能够利用培养基稀释法方法开展微生物限度检查;血栓心脉宁胶囊、骨筋丸胶囊可使用薄膜过滤法进行微生物限度检查。
参考文献：
[1]庞云娟， 樊文研， 刘康连，等. 药品微生物限度检查方法学验证的研究进展[J]. 中成药， 2017， 39（10）：2137-2140.
[2]顾珉， 许丹， 顾炳仁. 荧光染色计数法在制药用水微生物限度检查替代应用初探[J]. 中国药品标准， 2017， 18（4）：298-303.
[3]戴宇婷， 倪兆武， 侯晋芳. 口服补液的微生物限度检查方法学验证[J]. 中国药物经济学， 2017， 12（2）：20-22.
[4]徐莲花. 药品微生物限度检验误差影响因素分析[J]. 中国卫生产业， 2017， 14（15）：42-43.
[5]朱莲花， 凌蕾. 不同药品包装材料微生物限度检测方法适用性验证[J]. 上海医药， 2017， 38（9）：73-75.
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