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摘要：建立了QuEChERS-气相色谱快速测定蔬菜中咪鲜胺及其代谢物2，4，6-三氯苯酚残留量的方法。样品经乙酸酸化乙腈提取后，以无水硫酸镁和N-丙基乙二胺（PSA）净化，并利用气相色谱进行检测。结果表明，在最佳条件下，咪鲜胺及其代谢物2，4，6-三氯苯酚分别在0.005～1.000和0.002～1.000 μg/mL范围内线性关系良好，相关系数分别为0.998 6和0.999 3，检出限分别为0.001 0和0.000 6 mg/kg;在0.02、0.10、0.50 μg/mL 3个添加水平下回收率分别为92.1%～107.9%和91.4%～105.7%，相对标准偏差分别为2.4%～10.4%和2.6%～11.3%。该方法具有快速、便捷、安全、清洁和成本低等特点，可用于蔬菜中咪鲜胺及其代谢物2，4，6-三氯苯酚残留的快速测定。
关键词：QuEChERS;气相色谱;咪鲜胺;2，4，6-三氯苯酚;蔬菜
中图分类号：O657.63 文献标识码：A
文章编号：0439-8114（2019）01-0103-04
DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.01.025 开放科学（资源服务）标识码（OSID）：
Rapid Determination of Residues of Prochloraz and 2，4，6-Trichlorophenol in Vegetables by QuEChERS-Gas Chromatogarphy
ZHANG Yan-jun1，2，QIAN Ying-wen1，2，CHAI Zong-long1，2，SHI Rui-rui1，2，
ZHANG Nan1，2，YOU Yi-na1，2，LIU Qi1，2，HONG Xia1，2
（1.Gansu Institute of Business and Technology Co.，Ltd.，Lanzhou 730010，China;
2.Gansu Zhongshang Food Quality Test and Detection Co.，Ltd.，Lanzhou 730010，China）
Abstract： To developed a rapid method for the determination of residues of prochloraz and its metabolite 2，4，6-trichlorophenol in vegetables by QuEChERS and gas chromatography（GC）. The samples were extracted with acetonitrile-acetic acid， purified by PSA，and determined by GC. The results showed that prochloraz and its metabolite 2，4，6-trichlorophenol had a good linearity in the range of 0.005～1.000 μg/mL and 0.002～1.000 μg/mL， the correlation were 0.998 6 and 0.999 3 under the optimal conditions. The limit of detection for prochloraz and its metabolite 2，4，6-trichlorophenol were 0.001 0 mg/kg and 0.000 6 mg/kg， respectively. Their average recoveries at spiked levels of 0.01， 0.10 and 0.50 μg/mL were 92.1%～107.9% and 91.4%～105.7% with relative standard deviations of 2.4%～10.4% and 2.6%～11.3%， respectively. This method was simple， efficient， quick， convenient， safe， clean， low-cost， and can be suitable for the analysis of prochloraz and 2，4，6-trichlorophenol residues in fruit vegetables.
Key words： QuEChERS; gas chromatography; prochloraz; 2，4，6-trichlorophenol; vegetables
咪鲜胺（Prochloraz，PCZ）是一种咪唑类广谱高效杀菌剂，其作用机理主要是通过抑制麦角甾醇的生物合成，破坏细胞膜结构功能，从而达到杀菌目的，对蔬菜多种子囊菌和半知菌引起的病害具有很好的保护和治疗作用，广泛用于防治蔬菜的白粉菌、叶斑病、炭疽菌等多种病害[1]。PCZ在环境中最终都降解为2，4，6-三氯苯酚（TCP）[2]，雖然PCZ属低毒杀菌剂，但最终产物TCP生物降解性差，易造成严重的环境污染，并被疑为强致癌物，对人类的健康造成潜在威胁[3]，其残留问题受到越来越多的关注。因此，在进行PCZ残留研究时应同时检测PCZ和TCP的含量。
国内外对于PCZ和TCP检测的前处理大多数是在210～240 ℃下样品提取液与吡啶盐酸盐发生水解反应，将PCZ及其代谢物全部转化为TCP，经萃取后采用磺化法净化，检测TCP的含量[4]。该方法操作复杂费时，且吡啶盐酸盐毒性较大，对试验人员的健康和环境安全造成威胁。QuEChERS方法为这一问题提供了新的解决途径，该方法是一种快速、简单、便宜、可靠和安全的样品前处理方法，用N-丙基乙二胺（PSA）去除组分中的色素，以无水硫酸镁去除水分，适用于蔬菜中PCZ和TCP残留的提取和净化，实用性强[5]。目前，对PCZ和TCP的检测方法有气相色谱法（GC）[6]、液相色谱法（LC）[7]、气相色谱-质谱联用法（GC-MS）[8]、液相色谱-质谱联用法（LC-MS）[9，10]等，主要涉及的样品有水果[11]、谷物[12]、油料作物[13]、中药材[14]和土壤[15]等，对于蔬菜中PCZ和TCP残留分析的方法较少。基于质谱法仪器昂贵，LC灵敏度相对GC低，本研究采用GC法，结合QuEChERS净化技术建立了一种安全简便的分析方法，测定蔬菜中PCZ和TCP残留量，以期达到快速、便捷、环保的目的。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
无水硫酸镁（分析纯，使用前650 ℃下灼烧4 h，备用），天津市凯信化学工业有限公司;乙酸钠（分析纯），天津市光复精细化工研究院;PSA，天津博纳艾杰尔科技有限公司;乙酸（分析纯），国药集团化学试剂有限公司;甲醇、乙腈（色谱纯），北京百灵威科技有限公司;丙酮（色谱纯），西陇科技股份有限公司;甲醇中PCZ溶液标准物质（25165XM，纯度98.4%，浓度为100 μg/mL）、甲醇中TCP溶液标准物质（26233XM，纯度99.5%，浓度为100 μg/mL），北京振翔科技有限公司。
2010 Plus气相色谱仪（μECD），日本岛津公司; J-TDL-60B型离心机，无锡市瑞江分析仪器有限公司;JJ500型电子天平，常熟市双杰测试仪器厂。
1.2 方法
1.2.1 气相色谱条件 SH-Rtx-1701毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）;进样口温度280 ℃，检测器温度300 ℃;升温程序：初始温度100 ℃保持1 min，以25 ℃/min升至200 ℃保持1 min，再以25 ℃/min升至270 ℃保持12 min;载气流量3 min/L，进样量1.0 μL，分流比10∶1。
1.2.2 样品处理 称取10.00 g样品于50 mL离心管，加10 mL 乙酸酸化乙腈（1∶99，V/V），摇匀，加3.0 g无水硫酸镁，1.0 g乙酸钠，涡旋1 min，4 000 r/min离心5 min。取上清液5 mL于15 mL离心管，加1.0 g 3∶1无水硫酸镁∶PSA混合液，涡旋1 min， 4 000 r/min离心5 min，取1 mL上清液过膜，待测。
1.2.3 标准溶液的配制 分别准确移取1 mL 100 μg/mL的PCZ和TCP标准品溶液至10 mL容量瓶中，用甲醇定容，配成两种10.0 μg/mL的标准储备液，分别吸取以上两种标准储备液适量，并用“1.2.2”萃取液稀释至质量浓度为0.002、0.005、0.010、0.020、0.050、0.100、0.200、0.500、1.000 μg/mL系列混合标准溶液。
2 结果与分析
2.1 萃取溶剂的选择
以辣椒、黄瓜、结球甘蓝、豇豆为基质添加0.1 μg/mL PCZ和TCP混合标准溶液按照“1.2.2”方法处理，考察乙腈和乙酸酸化乙腈对样品中PCZ和TCP回收率的影响。由表1可知，PCZ在乙腈和乙酸酸化乙腈中的回收率为95.4%～107.3%，两者对PCZ均有较好的提取效果，而TCP在乙腈中的回收率为80.6%～90.2%，在乙酸酸化乙腈中的回收率为92.6%～105.3%，说明TCP在乙酸酸化乙腈中的回收率比乙腈好。这是由于TCP具有较强的极性和酸性，其羟基上的H+与环境中的Na+进行交换从而生成2，4，6-三氯苯酚钠，而2，4，6-三氯苯酚钠在水相中的溶解度大于在有机相中的溶解度，有机相无法对样品基质中的2，4，6-三氯苯酚钠进行有效萃取，加入乙酸酸化乙腈，存在大量的H+，促进样品基质中2，4，6-三氯苯酚钠形成TCP，从而提高提取率。因此，本研究选择乙酸酸化乙腈溶液作为PCZ和TCP的提取剂。
2.2 无水硫酸镁和PSA用量的优化
本研究中使用3∶1的无水硫酸镁和PSA净化萃取液，PSA可去除萃取液中色素和其他干扰物质，无水硫酸镁去除萃取液中少量的水分，有助于加强PSA的净化效果。为了获得最佳的净化效果，按“1.2.2”方法在结球甘蓝、辣椒、黄瓜、豇豆中添加0.1 μg/mL PCZ和TCP混合标准溶液，分别以0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 g无水硫酸镁和PSA净化萃取液，观察不同用量的无水硫酸镁和PSA对萃取液的净化效果。结果表明，随无水硫酸镁和PSA用量的增加萃取液净化效果越好，回收率为79.4%～104.7%。由图1可知，当无水硫酸镁和PSA的量达到1.0 g后TCP和PCZ的回收率基本不变。综合净化效果和回收率，本研究选择1.0 g无水硫酸镁和PSA净化萃取液。
2.3 线性范围和检出限
取“1.2.3”配制的PCZ和TCP标准混合工作液，在最佳的试验条件下检测PCZ和TCP（图2）。以进样质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，得到PCZ和TCP的线性方程分别为Y=3 256 600X-5 393.7和Y =6141 770X-4 616.3，其相关系数分别为0.998 6和0.999 3，表明PCZ和TCP分别在0.005～1.000 μg/mL和0.002～1.000 μg/mL范圍内的线性关系均良好（图3）。以3倍信噪比（S/N=3）确定PCZ和TCP检出限分别为0.001 0 mg/kg和0.000 6 mg/kg，满足残留定量分析要求。
2.4 回收率和精密度
按照“1.2.2”方法分别对结球甘蓝、辣椒、黄瓜、豇豆添加0.02、0.10、0.50 μg/mL 3个水平的PCZ和TCP标准溶液。由表2可知，在3个添加水平下PCZ和TCP的回收率分别为92.1%～107.9%和91.4%～105.7%，RSD分别为2.4%～10.4%和2.6%～11.3%，表明该方法具有较高的准确度和精密度。因此，试验中开发的方法满足TCP和PCZ分析的要求，可用于结球甘蓝、辣椒、黄瓜和豇豆等样品中TCP和PCZ残留的检测。
2.5 实样分析
按“1.2.2”样品处理步骤，以市售的结球甘蓝、辣椒、黄瓜、豇豆、山药、西红柿、韭菜、花椰菜等8种40个代表性蔬菜样品进行定性定量分析。由表3可知，辣椒和西红柿2个样品检出PCZ和TCP 残留，其余样品均未检出，对样品重复检测5次，PCZ和TCP分别为0.018～0.092 mg/kg和0.049～0.131 mg/kg。
3 结论
本研究采用QuEChERS-GC法对蔬菜中咪鲜胺及其代谢物2，4，6-三氯苯酚残留量检测技术进行了分析。该方法前处理简便快速、选择性好、灵敏度高、抗干扰能力强，分别在0.005～1.000 μg/mL和0.002～1.0 μg/mL具有良好的线性响应，且在0.02、 0.10、0.50 μg/mL添加水平下，两种农药均有较好的回收率，表明该方法符合农药残留分析的要求，可作为大批量蔬菜中咪鲜胺及其代谢物2，4，6-三氯苯酚残留检测的可靠方法。
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