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【摘 要】我国在建立市场经济体制之后，逐渐出现了较多药品生产企业，也相应加剧了药品生产企业的市场竞争力。为了确保药品生产质量，必须反复检验药物安全性和治疗效果，无菌检验方法能够对药品质量安全进行验证。此次研究主要是探讨分析药品生产企业无菌检验方法，希望能够对相关人员起到参考性价值。
【关键词】药品生产企业;无菌检验方法;验证方法
【中图分类号】R256.21 【文献标识码】A 【文章编号】1005-0019（2019）23--01
1、无菌检验的样品与设备
准备左氧氟沙星样品，在准备之前需要对检验设备进行消毒处理，包括振荡仪、HTY-K性培养器皿、智能集菌仪，保证检验设备的无菌效果和性能稳定性，满足无菌检验的要求，严格控制整个试验过程，以此维护检验结果的准确性，之后需要控制样品规格和质量，确保满足试验标准要求。在采集和存储样品时应当满足相关标准规定，之后准备试验菌株[3]。在选择试验菌株时应当考虑到药品，确保试验菌株的有效性和针对性。同时，为了确保整个实验操作的有效性，必须确保检验操作人员具备专业化知识与技能，能够确保整个实验操作的科学性。
2、制备试验菌液
现阶段，在验证无菌检验方法时主要应用白色念珠菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、生孢梭菌等。对于以上菌株的制备方法主要有接种新型菌株培养物至培养基中，在30摄氏度温度下培养20h左右，选取1ml培养物，添加9ml无菌氯化钠溶液（0.9%），稀释至1ml菌株含量低于100CFU的菌悬液。對于白色念珠菌来说，接种新型菌株培养物至改良马丁培养基中，在30摄氏度温度下培养20h左右，添加9ml无菌氯化钠溶液（0.9%），稀释至1ml菌株含量低于100CFU的菌悬液。但是生孢梭菌的制备方法比较特殊，需要选取新鲜培养物至硫乙醇酸盐培养基中，在30摄氏度温度下培养20h左右[4]。选取1ml培养物添加9ml无菌氯化钠溶液（0.9%），稀释至1ml菌株含量低于100CFU的菌悬液。
3、验证方法与验证结果/
3.1 验证方法 按照薄膜过滤法将左氧氟沙星放置于管内，并且泵入培养基中，将100CFU试验菌置入于管内，作为试验管Ⅰ组;之后按照薄膜过滤法将样品置入到另外一管中，清洗剂氯化钠-蛋白缓冲液，进行三次冲洗，每次泵入100ml，并且在两管内接入100CFU试验菌作为试验管Ⅱ组。按照薄膜过滤法将样品过滤到另一管中，使用氯化钠-蛋白缓冲液进行五次冲洗，泵入100ml于培养基中，将相同培养基分别与管进行连接，在两管内接入100CFU试验菌作为试验管Ⅲ组，选取改良马丁培养基与硫乙醇酸盐培养基，将另外两管集菌器泵入至培养基中，将其作为阴性对照组，以上试管都需要培养3d以上。
3.2 试验结果 试验管Ⅰ组结果：霉菌生长，金黄色葡萄球菌、细菌、铜绿假单胞菌以及枯草芽孢杆菌不能正常生长。提示样品乙酯效果会影响无菌检查结果判断，此时需要应用清洗剂将干扰消除。试验管Ⅱ组结果：铜绿假单胞菌在48h内正常生长，金黄色葡萄球菌于5d后生长，生孢梭菌、枯草芽孢杆菌均无法正常生长，提示样品抑菌效果未彻底消除，还需要增加清洗剂使用剂量。试验管Ⅲ组结果：按照试验温度进行培养，样品试验管均清澈，且阳性管呈良好生长态势，供试品满足相关规定[5]。根据实验方法所建立的无菌检验方法验证，能够作为左氧氟沙星的无菌检查方法。
4、微生物酶发酵
利用微生物技术，通过高度工程化的新型综合技术，以利用微生物反应过程为基础，依赖于微生物机体在反应器内的生长繁殖及代近程来合成一定产物，通过分离纳进行提取精制，并最终制剂成型来实现药物产品的生产各种酶制剂糖化酶、-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等天冬酰胺酶：抗癌;纳豆激酶、链激酶：治疗血栓青霉素酰化酶：青霉素生产需要诱导或遭受阻遏、抑制等调控作用，在菌种选育、培养基配制以及发酵条件等方面需注意。
5、药品生产企业无菌检验方法验证的实例分析
本次研究主要是围绕甘草提取物粉微生物限度检查方法为案例进行分析讨论。
5.1 仪器与材料 选择高压灭菌器、细菌培养箱、生物安全柜、微波炉以及生化培养箱为主要操作仪器。试剂包括甘草提取物粉。培养基：胆盐乳糖发酵培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖发酵培养基、胆盐乳糖增菌液、营养琼脂培养基、改良马丁培养基、麦康凯琼脂培养基等试验用菌种：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、大肠埃希菌。
5.2 方法 第一，制备试验菌株菌液。分别选择1ml枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌，添加至9ml氯化钠溶液（0.9%）中进行稀释，制作菌悬液。选取1ml白色念珠菌培养物，添加至9ml氯化钠溶液（0.9%）中进行稀释，制作菌悬液。选取黑曲霉菌培养物，添加至4ml氯化钠溶液（0.9%）中进行洗涤，之后置入空管内，标准比浊处理之后，选取1ml溶液于9ml氯化钠溶液（0.9%）中进行稀释，制作菌悬液。第二，制备供试液。选取10g样品，添加至100ml缓冲液中，制作为1：10浓度的供试液。第三，常规法。选取1ml供试液，加入75cfu试验菌，之后注入到20ml培养基中，制备两个平皿，待至培养基凝固后置于常温进行培养观察，菌落数计算结果为实验组，将相应添加的菌数作为菌液组，供试品作为对照组，对回收率进行计算。第四，培养基稀释法。选取供试液，添加75cfu试验菌，按照“常规法”开展试验。结果如表1所示。
7、结束语
综上所述，对于药品生产企业来说，必须在无菌环境下观察药物的抑菌活性效果，通过验证无菌检验方法，可以有效验证此种检验方法的效果和结论，充分展现出试验方法的准确性，加强医疗检验的科学性。使用无菌检验法对药物质量与药效进行检验，能够有效提升药品安全性。同时有助于加强药品生产企业的竞争实力，规范整个药品生产行业，增加药物治疗效果。
参考文献
徐晶，张文一.医药企业规范化发展的启示——基于对药品飞行检查案例的剖析[J].中国市场，2019（17）：85-86.
朱天虹，王小乔，许晓辉，等.在食品药品检验实验室引入6S管理机制的探讨[J].农业科技与信息，2019（09）：54-55+66.