作者单位：518116 广东省深圳市第九人民医院（刘圣活）；广东省中山大学化学与化学工程学院（帅心涛）；广东省深圳市龙岗区人民医院（周建华，胡凤霞）
通讯作者：刘圣活
【摘要】 目的 探讨MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物治疗人胃癌裸鼠移植瘤的疗效。方法 采用裸鼠BGC-823胃腺癌动物模型，每组6只，随机分配至设立的生理盐水对照组、载体材料组、紫杉醇常规药物组、非靶向紫杉醇纳米药物组、MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物组。采用尾静脉给药方式，动态观察并测定肿瘤的体积、瘤质量抑瘤率，评价治疗效果，并观察实验期间动物的全身情况及相对体质量变化，评价毒副作用。结果 MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物组人胃癌移植瘤表现出明显的体积抑制和瘤质量抑制，抑瘤率分别为84.6%和84.5%,显著高于紫杉醇常规药物组（45.1%,48.7%）和非靶向紫杉醇纳米药物组38.7%,42.2%），而且MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物组的小鼠体质量与其它各组比较相对平稳，且饮食活动正常，对正常组织的毒副作用明显减轻。结论 MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物具有良好的高效低毒体内抗肿瘤作用，作为一种新型药物载体显示了良好的应用前景。
【关键词】 胃癌； MG7抗体靶向紫杉醇纳米药； 靶向治疗
A study on gastric cancer therapy and diagnosis with MG7 antibody targeting paclitaxel nano-drugs LIU Sheng-huo, SHUAI Xin-tao，ZHOU Jian-hua， HU Feng-xia.The Ninth People"s Hospital Of Shenzhen, Shenzhen 518116,China
【Abstract】 Objective To study the curative effect of MG7 antibody targeting paclitaxel nano-drugs on human gastric cancer xenografts in nude mice.Methods Human gastric cell line BGC-823 was implanted into 30 nude mice Drugs were injected through the caudal vein in 5 different groups with established experimental models Tumor growth was monitored once other day.Results The growth speed of tumro in the group of MG7 antibody targeting paclitaxel nano-drugs was significantly slower than the other groups The rates of tumor restrain in tumor weight and tumor volume of the MG7 antibody targeting paclitaxel nano-drugs group were 84.6% and 84.5% respectively, remarkably higher than other groups.The side-effect and toxicity in the MG7 antibody targeting paclitaxel nano-drugs group were significantly less than in the other groups.Conclusion MG7 antibody targeting paclitaxel nano-drugs can inhibit the growthof tumor,which indicates a favorable foreground for its clinical application.
【Key words】 Gastric cancer； MG7-Ab Paclitaxel nano-drugs； Targeting therapy
胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，尤其在我国的发病率和死亡率仍居首位［1］，新近资料显示，我国胃癌死亡率总体呈上升趋势［2］。传统的手术治疗、放射治疗、化疗等疗效较差，5年生存率很低，化疗仍然是胃癌的标准治疗手段之一［3］。然而由于化疗药物对肿瘤细胞缺乏特异性且毒副作用大，传统途径给药模式由于化疗药物用量大，大多缺乏药理作用专一性，对正常组织产生严重的不良反应，因此提高药物抗肿瘤效果，减低毒副作用迫在眉睫，实现这个目标的一个重要方法是将化疗药物与载体相结合，以改变化疗药物在体内分布来提高肿瘤局部的药物浓度，最大限度降低非肿瘤部位的药物浓度，从而减少化疗药物带来的毒副作用［4］。
笔者在研究工作中，将靶向胃癌细胞的单克隆单链抗体（MG7-Ab）与抗癌药紫杉醇负载到同一个纳米体系中，通过MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物对人胃癌裸鼠移植瘤作用观察，为靶向治疗肿瘤提供生物医学基础，为今后进一步深入研究提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 实验材料
1.1.1 肿瘤细胞株和动物 BALB/C nu/nu裸鼠（购自北京维通利华实验动物技术有限公司），无特殊病原菌（SPF）级，雄性，6～7周龄，体质量18～20 g，动物质量合格证号为SCXX（京）2006～0007，于中山大学附属中山一院实验中心SPF条件下饲养。人低分化胃腺癌BGC-823细胞株为本室保存。
1.1.2 紫杉醇（北京协和药厂）、MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物及非靶向紫杉醇纳米药物由中山大学化学与化学工程学院制备。RPMI-1640培养基系GIBCO公司产品，按产品说明书配制，过渡除菌备用，胰蛋白酶系华文生物工程公司产品，以1640培养液制成2.5 g/L浓度备用，新生小牛血清系兰州民海生物工程公司生产。
1.2 细胞培养 将人胃癌BGC-823细胞培养于37 ℃ 5% CO2培养箱中，加入含10%新生小牛血清的RPMI-1640培养液。传代时用0.25%的胰酶消化处理和PBS洗涤。
1.3 人胃癌裸鼠移植瘤模型的建立 人胃癌BGC-823细胞生长至铺满培养瓶80%～90%时，用0.25%的胰酶消化后收集，制成单细胞悬液，悬浮于无血清的RPMI-1640培养液中，显微镜下计数并调整细胞数至（4～6）×107/ml，分别接种于裸鼠右侧腹股沟皮下，每只0.1 ml。细胞种植14 d后，选择肿瘤体积为100 mm3左右裸鼠为实验模型。
1.4 实验分组和给药方法 移植性人胃癌裸鼠30只，随机分为生理盐水对照组（A）、载体材料组（B）、紫杉醇常规药物组（C）、非靶向紫杉醇纳米药物组（D）、MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物组（E），共5组，每组6只，隔天尾静脉注射给药，各组紫杉醇剂量按10 mg/kg体质量计算。
1.5 肿瘤体积变化及抑瘤率 隔天（第3、5、7、9和11天）用游标卡尺测量肿瘤长径a和垂直于a的最大横径b，用电子天平称量裸鼠体质量。第11天拉脱颈椎处死裸鼠，在超净工作台上解剖观察，剥离瘤体称重，同时将肿瘤剥离拍照观察各组小鼠肿瘤体积变化的差异，按照公式：瘤体积 ab2；体积抑瘤率（%）（1-）×100%；瘤重抑瘤率（%）（1-）×100% 分别计算肿瘤体积、体积抑瘤率及瘤重抑瘤率，然后以每组动物移植瘤体积的平均值为纵坐标绘制移植瘤生长曲线。
1.6 实验动物的全身状况和体质量变化 每天观察各组动物的饮食、活动、皮色等方面变化，隔天测量一次裸鼠体质量，观察其变化情况，以每组动物体质量变化曲线为纵坐标，处理时间为横坐标，绘制体质量变化曲线。
1.7 统计学分析 采用SPSS 11.5统计软件完成所有统计分析，定量测定结果以均数±标准差（x±s）表示单因素方差分析比较多个样本的均数，Dunnett-t检验检测MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物组与其它实验组均数的差异，以P≤0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 肿瘤体积变化及体积抑瘤率 紫杉醇常规药物组、非靶向紫杉醇纳米药物组、MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物组的抑瘤率分别为38.7%、45.5%和84.6%，MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物组的肿瘤增长速度明显低于其它各组（P＜0.05）。生理盐水对照组、载体材料组、紫杉醇常规药物组、非靶向紫杉醇纳米药物组肿瘤体积则较大，形状不规则，着色较深，表明肿瘤组织生长旺盛。与上述各组相比，MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物组的肿瘤体积较小，形状较规则，颜色也较浅，提示肿瘤组织生长受到抑制。结果见表1、图1。
2.2 肿瘤瘤重及瘤重抑瘤率 MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物组裸小鼠瘤重明显低于其它实验组（P＜0.05），抑瘤率最高，与紫杉醇常规药物组、非靶向紫杉醇纳米药物组比，MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物组治疗后瘤质量明显减轻（P＜0.05），抑瘤率明显增加。结果见表2。
2.3 实验期间动物的全身情况及相对体质量变化 在实验期间，紫杉醇常规药物组、非靶向紫杉醇纳米药物组的裸鼠后期反应迟钝，饮食及活动均较差，皮肤无光泽，体质量下降较快。各实验组由于药物毒性的差异显示相应变化，而MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物组的体质量与其它组比较相应平稳，且饮食活动较正常。
表1 各组裸鼠肿瘤体积变化及体积抑瘤率
注：与生理盐水对照组比较，*P＜0.01；与其它组比较,△P＜0.05
表2 各组裸鼠瘤体平均质量和瘤重抑瘤率
注：与等渗盐水组比较,*P＜0.01；与其它组比较,△P＜0.05
3 讨论
随着人们对肿瘤认识逐步加强，以及新型抗肿瘤药物的不断问世，化疗在肿瘤治疗中的地位正逐步提高，成为许多肿瘤的主要治疗手段，但系统化疗存在全身药物的再分布，同时药物缺乏对病变部位的特异亲和性，当用药剂量很大时才能在靶部位产生较高的局部浓度，但大剂量抗癌药可对正常组织产生非特异毒副作用，产生肝肾损害、骨髓抑制、胃肠道反应等多种毒副作用。药物靶向治疗可在一定程度上解决这些问题，使靶部位的药物浓度明显提高，可减少用药量，使治疗费用下降，明显降低药物对全身的毒副作用。
胃癌相关抗原MG7-Ag是目前研究中一个最有前景的胃癌靶向诊断和治疗的肿瘤标记物，主要分布在癌细胞的胞浆内或胞膜上，也可分布于癌腺腔内或癌细胞周围的黏液物质中，不出现在血液中，具有很高的特异性，在健康人和良性疾病几乎不表达，在胃癌组织中高表达，对胃癌有很高的诊断与治疗价值，因此MG7抗体是一个很有前景的胃癌靶向诊断和治疗的肿瘤标记物。
紫杉醇是国际上公认为首选的抗癌药物，为治疗效果好、广谱性强、副作用相对小、作用机制全新的一种一线抗癌药物，但因明显剂量相关的骨髓抑制和神经损害等副作用制约其大剂量应用。
MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物为中山大学化学与化工学院首次自行合成的纳米载体药物，即把胃癌细胞的单克隆单链抗体（MG7-Ab）与抗癌药紫杉醇负载到同一个纳米体系中，从而提高治疗胃癌的靶向性与紫杉醇的抗癌效应。作为载体纳米颗粒是一种多功能复合纳米粒子，具有表面亲水、内部疏水的独特壳－核结构，其亲水性的外壳使颗粒能够高度分散于机体水溶性内环境并随血液循环传输到特定部位，而其疏水性内核则可以充当疏水性药物控制释放的“纳米药库”［5］，使纳米颗粒成为具有优良的传输性能，选择性到达并定位于肿瘤靶区，使药物以受控的方式从载体中释放，然后在肿瘤组织的细胞或亚细胞水平上发挥药效作用，同时减少药物与正常组织或细胞的接触，明显减少毒性副作用［6］。
以人胃癌裸鼠作为动物模型，通过尾静脉注射MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物，该组肿瘤生长速度较其它各组明显减慢，体积抑瘤率和瘤质量抑瘤率高达84.6%和84.5%，而紫杉醇常规药物组体积抑瘤率和瘤质量抑瘤率分别为38.7%和42.2%，和MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物比较，差异有显著性（P值分别为0.0165，0.0197）,MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物抗肿瘤效果显著高于目前临床上常用的紫杉醇注射组，在实验期间MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物组体质量与其它各组相比较平稳，且饮食活动正常，而紫杉醇常规药物组与非靶向紫杉醇纳米药物组体质量下降较明显，可见MG7抗体与紫杉醇负载到同一纳米体系中后，其药物毒性明显降价，并具有高效的肿瘤靶向性，从而提高疗效和减少药物的毒副作用。
MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物可较强抑制胃腺癌细胞的增殖活性，同时降低药物的毒副作用，本实验也进一步证实了MG7抗体靶向紫杉醇纳米药物在体内抗肿瘤作用，为其应用于临床胃癌治疗提供必要理论依据，目前靶向纳米技术治疗肿瘤，国内外还处于起步阶段，但其作为一种新型抗肿瘤纳米药物载体显示了良好的应用前景。
参 考 文 献
［1］ 孙秀娣，牧人，周有尚，等.中国1990-1992年胃癌死亡调查分析.中华肿瘤杂志，2002，24：4-8.
［2］ 孙秀娣，牧人，周有尚，等.中国胃癌死亡率20年变化情况分析及其发展趋势预测.中华肿瘤杂志，2004，26：4-9.
［3］ Alexiou C,Schmid RJ,Jurgons R,et al.Targeting cancer cell:magnetic nanoparticles.Eur Biophys J,2006，35:446-450.
［4］ Abdollahi A,Hlatky L,Huber PE.Endostatin:the logic of antiangiogenic therapy.Drug Resist Updat,2005，8:59-74.
［5］ Norased Nasongkla, Erik Bey,Jimin Ren, et al. Multifunctional Polymeric Micelles as Cancer-Targeted, MRI-Ultrasensitive Drug Delivery Systems. Nano letters,2006,6（11）:2427-2430.
［6］ Hua Ai,Christopher Flask,Xintao Shuai,et al.Magnetite-loaded polymeric micelles as ultrasensitive magnetic-resonance probes. Advanced Materials,2005,17:1949-1952.
（收稿日期：2011-03-31）
（本文编辑：陈丹云）