【摘 要】目的：观察不同浓度雌二醇及其受体抑制剂ICI 182 780对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌SKOV3细胞体外增殖及凋亡的影响，探讨雌激素及其受体抑制剂在卵巢癌生长中作用及临床意义。方法：体外培养SKOV3细胞，加入不同浓度E2及（E2+ICI 182 780）：（1）计数1-6天的细胞数量，并描绘细胞增殖曲线；（2）MTT法检测细胞增殖抑制率；（3）流式细胞术测定SKOV3细胞凋亡率。观察不同浓度雌二醇及其受体抑制剂ICI 182 780对SKOV3细胞系体外增殖的作用。结果：（1）细胞培养4天时，与对照组（单纯培养）相比，高浓度E2组（10-7mol/L）的SKOV3细胞增殖明显受抑制，低浓度E2组（10-11mol/L）细胞则增殖较明显（P<0.05）；加入与E2相同浓度的ICI 182 780后，抵消了E2对细胞增殖的影响作用，且在低浓度（10-11mol/L）时，ICI 182 780具有明显抑制细胞增殖的作用（P<0.05）。（2）高浓度E2组（10-7-10-5 mol/L）与对照组比较，作用24h、48h后均有明显增殖抑制率升高（P<0.05），当E2浓度为10-9 mol/L时，细胞增殖与对照组无显著差异（P>0.05），低浓度E2组（10-13-10-11 mol/L）则具有促细胞增殖作用（P<0.01）；加入同浓度雌激素受体抑制剂ICI 182 780，高浓度组（10-7-10-5 mol/L）仅部分抵消了E2的增殖抑制作用，细胞增殖抑制率低于E2组，但仍高于对照组（P<0.05），低浓度组（10-13-10-11 mol/L）能完全对抗E2促增殖作用，抑制率与对照组无明显差异（P>0.05）；当（E2+ ICI 182 780）浓度为10-9 mol/L时，表现为对SKOV3细胞增殖的抑制作用，24h及48h抑制率分别达11.7%、7.9%，明显高于同浓度E2组（P<0.05）。（3）SKOV3细胞在10-7mol/L的E2作用24h、48h的总凋亡率分别为26.11%、17.72%（早期凋亡率为20.68%、16.65%），与对照组相比，具有明显的促细胞凋亡作用（P<0.01），当药物浓度在10-11mol/L、10-9mol/L时，E2组细胞凋亡率与对照组均无明显差异（P>0.05）；加入相同浓度ICI 182 780后，24h、48h的凋亡率（11.79%～14.79%，10.90%～13.15%）均明显高于对照组（P<0.05）。结论：（1）高浓度雌二醇对SKOV3细胞生长具有明显的抑制作用且具有促凋亡的作用；（2）低浓度（近生理浓度）雌二醇对肿瘤细胞生长有促增殖的作用；（3）雌激素受体抑制剂可对抗雌激素的作用，且可能有促进细胞凋亡的作用。
【关键词】卵巢浆液性乳头状囊腺癌；雌二醇；雌激素受体抑制剂ICI 182 780；细胞凋亡
【中图分类号】R73 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）03-0033-04
前言
卵巢癌是女性生殖系统常见的三大恶性肿瘤之一，卵巢上皮性恶性肿瘤占原发卵巢恶性肿瘤的50%-70%，由于缺乏早期诊断手段，其5年生存率为30%～40%，病死率居妇科肿瘤首位【1】。许多研究表明雌激素与上皮性卵巢癌的发生、发展有着密切的关系，雌激素的使用增加了女性患卵巢癌的风险【2-4】，亦会增强卵巢癌细胞迁移的倾向，即增加转移的机率【5】。也有研究表明口服避孕药可以降低卵巢癌发生率和死亡率【6】。但目前关于雌激素在卵巢癌中的作用机制尚不十分清楚。
研究表明，上皮性卵巢癌中广泛存在雌激素受体的高表达【7】，雌激素对体外卵巢癌细胞生长的调控是细胞类型特异性的，其机制可能与细胞内雌激素受体的不同表达有关。同一浓度的E2作用于不同来源的卵巢癌细胞，其作用效果是有差别的，激素受体阳性的癌细胞较阴性的敏感【8】。ICI 182 780（氟维司群）是一种甾体类选择性雌激素受体调节剂，是ER的特异性拮抗剂，其通过加速ER降解而下调ER，可使癌细胞不进入细胞周期从而对抗雌激素的促增殖作用，ICI 182 780无雌激素样作用，已成为治疗晚期乳腺癌的新一代有效药物【9】。由此推测，雌激素受体特异性拮抗剂ICI 182 780，可能对上皮性卵巢癌有一定的治疗效果。
本实验以卵巢浆液性乳头状囊腺癌SKOV3细胞系为研究对象，通过体外实验探讨雌激素及其受体抑制剂在卵巢癌细胞生长中的作用机制，以期为上皮性卵巢癌的临床治疗提供理论依据。
材料与方法
一、材料
（一）主要仪器
1）无菌工作台：Terra Universal Inc，USA
2）二氧化碳培养箱：Heracus，Germany
3）光学显微镜：Olympus，Japan
4）台式高速离心机： Sigma，USA
5）100、1000ul的微量加样器： Brand，USA
6）全自动酶标仪： Bio-rad，USA
7）超速低温离心机： Beckman，USA
8）流式细胞仪： Facs Vantagese，USA
9）6、96孔细胞培养板、25cm2培养瓶： 大连绿竹科技有限公司
（二）药物及试剂
1.试剂
二甲基亚砜（DMSO）：AMRESCO公司，-20℃保存；
胎牛血清：GIBCO公司，-4℃保存；
Dextran-charcoal-stripped FCS：MultiSer公司，-4℃保存；
DMEM培养基：GIBCO公司，临用前按浓度为10%加入胎牛血清，-4℃保存；
AnnexinV-FITc凋亡测试试剂盒：南京凯基生物制品有限公司，-4℃保存。