摘 要：关于测定中成药止咳药品中橙皮苷的含量，实验选择HPLC（高效液相色谱）的方法测定部分中成药止咳药品中含有的橙皮苷的量，分析实验的过程，以便为评价止咳药品质量提供参考。
关键词：HPLC；止咳药品；橙皮苷；测定含量
橙皮苷是二氢黄酮的一种衍生物，具备调节免疫力、抗菌、抗氧化以及抗癌等药理活性。大量调查显示出黄酮类的化合物具备双重的促进抗氧化、促进氧化的作用，而作为有最强的促进氧化作用的黄酮类化合物物质，橙皮苷会对人体基因发挥出重要诱导毒害的作用。为有效控制止咳药品的质量，就需对其中的橙皮苷含量进行测定。目前大多采用HPLC高效液相色谱实验法对止咳药品中橙皮苷的含量进行测定。
1 HPLC实验法简介
HPLC就是基于经典色谱实验法加入气相色谱的理论，在技术层面把流动相转变成高压输送，选择小粒径材料填充色谱柱，其柱效和经典液相色谱比起来存在显著的优势[1]。通过把比例不同的混合溶剂或极性不同的单一溶剂等流动相泵入色谱柱，它们在柱中被分离，在进入到检测器之后实施检测。HPLC高效液相色谱实验法具备应用范围广、速度快、灵敏度大、效能高等优势，在临床检测里已经有广泛的应用[2]。应用范围广指的是可利用HPLC实验法分析超过70%的有机化合物，特别是热稳定性较差、大分子、强极性的化合物；速度快指的是分析的速度以及载体流速等较快，和经典色谱实验法比起来差异明显，一般分析某个样品的时间不会超过半小时，部分样品甚至不会超过5min；灵敏度大指的是紫外检测器能达到0.01ng，进样量是μL数量级；效能高指的是分离的效能高，可选择固定相、流动相，达到最佳的时分离效能。
2 HPLC实验法测定
2.1 实验器材
实验仪器：高效液相色谱仪Prostar325型（美国Varian公司）；超声波清洗器KQ-250（昆山市超声仪器有限公司）；电子天平BS110S（北京赛多利斯有限公司）；紫外可见分光光度计Cam 50（美国Varian公司）。
实验的试剂及材料：橙皮苷（中国药品研究所，批号：20140215），醋酸为分析纯，甲醇为色谱纯，都是Merck公司所提供。川贝枇杷糖浆（桂林葛仙翁药业有限公司，批号：20140312）、半夏止咳糖浆（西安澜泰药业有限公司，批号：20140402）、百咳静止咳糖浆（四川天诚制药有限公司，批号：20140315）、雪梨膏（湖北华光有限公司，批號：20140316）、强力枇杷露（合肥今越制药有限公司，批号：20140209）。
2.2 实验方法
样品溶液的制备方法：取5mL川贝枇杷糖浆以及半夏止咳糖浆等常用的止咳药品，在加入10mL甲醇之后实施超声处理，其时间是15min，在经过抽滤之后反复提取5次，经过2.5h的加热回流，将100mL甲醇溶液加入其中，赤血加热回流，待提取液呈现出透明状态时将其放冷，之后过滤，合并滤液，选择少量甲醇分次清洗容器，并在同一个量瓶里放置滤液，加入甲醇50mL以后就可获得供试品溶液。
分析方法：依托紫外可见分光光度计测定橙皮中最大吸收波长，精密称取对照品10mg，通过甲醇将其溶解为100mL，取出5mL放置到50mL量瓶里面，再加入甲醇至刻度，在200～350nm波长范围以内扫描，当达到285nm波长时就有最大吸收峰。通过HPLC实验法测量止咳药品中橙皮苷含量时，色谱柱：Kromasil C18（4.6mmx250mm，5μm）；流动相：甲醇：水：醋酸（35：61：4）；检测波长285nm；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃。
检测波长的选择：分别在波长200～400nm的范围内对橙皮苷的甲醇溶液实施波长扫描，结果显示在283nm处橙皮苷有最大吸收，因而决定将283nm作为实验测定的波长。
选择提取溶剂：参考《中国药典》2010年版一部白芍项下提取方法及原标准提取方法，在该实验中分别考察三种溶剂，即甲醇、乙酸乙酷、水饱和正丁醇，结果甲醇、水饱和正醇的提取含量有相近结果，但提取的甲醇样品杂质没有较好的干扰分离效果，提取的水饱和正醇样品却有很好的分离效果，故将水饱和正丁醇定为实验的提取溶剂。
考察提取时间：分别对样品进行了超声20min、30min、40min、振荡60min、浸泡过夜超声30min的考察，结果有最高提取效率的是浸泡过夜超声30min。所以将提取时间选定浸泡过夜超声30min。
考察含量：分别在单波长下测定橙皮苷的含量，在280nm波长时，测定橙皮苷的含量为0.9mg/g；再用HPLC高效液相色谱实验法测定橙皮苷的含量，确定橙皮苷的含量0.9mg/g。可见这两种实验方法测定出相同的结果，而HPLC高效液相色谱实验法操作更简便，结果更准确。
2.3 实验结果
本实验采用HPLC实验法将多种止咳药品中含有橙皮苷的量测定出来，方法简便，分析快速，重现性好，对止咳药品质量有更准确的控制，为止咳药品的开发提供了更科学的依据。
3 结论
尽管橙皮是臣药，但其中有较大含量的橙皮苷，有良好的质量控制性，用HPLC实验法把橙皮里面含有橙皮苷的量测定出来，在已经选定的色谱条件下，供试品中橙皮苷和相邻组份色谱峰之间有良好的分离度，阴性液没有干扰。在方法学的考察下，以现行色谱为条件，方法的精密度及稳定性、回收率实验等都良好。所以确立把止咳药品中含有橙皮苷的量作为测定的指标，把HPLC实验法作为测定的基本方法，该方法快速、简便，有加强的专属性和较好的重现性，可作为控制止咳药品质量的有效方法。
参考文献：
[1]陈慧.HPLC测定小儿百部止咳糖浆中橙皮苷含量[J].广东微量元素科学，2016（02）：30-32.
[2]张宇博，刘光斌.HPLC测定止咳清肺口服液中橙皮苷的含量[J].中国执业药师，2015（12）：31-33.